大黃酚是EGFR / mTOR途徑抑制劑，可以在大黃和酢漿草中發現。

大黃酚的結構式

一、大黃酚的生物活性詳解：

1）體外活性

大黃酚（Chrysophanic Acid）透過抑制EGFR / mTOR途徑阻斷結腸癌細胞的增殖。大黃酚是一種天然蒽醌，在過量表達EGFR的SNU-C5人結腸癌細胞中具有抗癌活性。 SNU-C5細胞中的大黃酚處理抑制EGF誘導的EGFR磷酸化並抑制下游訊號分子的啟用，如AKT，細胞外訊號調節激酶（ERK）和哺乳動物雷帕黴素靶蛋白（mTOR）/核糖體蛋白S6激酶（p70S6K） ）。

當與mTOR抑制劑雷帕黴素組合時，大黃酚（80和120μM）顯著阻斷細胞增殖。大黃酚抑制EGF誘導的EGFR磷酸化並抑制AKT和mTOR / p70S6K的活化，並顯著阻斷細胞增殖。大黃酚劑量依賴性地降低CCK-8和過表達EGFR的SNU-C5細胞的活力。大黃酚處理在Tyr1068下劑量依賴性地降低EGF誘導的EGFR磷酸化。

大黃酚（80和120μM）降低了Ser2448處mTOR的磷酸化水平。大黃酚（80和120μM）也降低了Thr389處p70S6K的磷酸化水平。大黃酚抑制EGF誘導的EGFR活化並抑制下游訊號分子AKT和mTOR / p70S6K的啟用［1］。大黃酚（CA）抑制3T3-L1脂肪細胞中的脂質積累。大黃酚下調3T3-L1脂肪細胞中的脂肪形成因子。

大黃酚在原代培養的棕色脂肪細胞中誘導產熱因子。大黃酚透過啟用AMPK途徑抑制脂肪生成並誘導產熱［2］。在Buffalo green monkey腎臟細胞中，大黃酚能夠抑制Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰質炎病毒誘導產生的細胞病理效應。在EGFR過表達的SNU-C5人類結腸癌細胞中，大黃酚抑制EGFR中EGF誘導的磷酸化，抑制細胞增殖，具有抗癌活性。

2）體內活性

大黃酚（CA）改善C57BL / 6小鼠中HFD誘導的肥胖。 在雄性C57BL / 6J小鼠中進行大黃酚的體內效能以確定施用的大黃酚的功效。 餵食HFD的小鼠比餵食標準飲食小鼠的小鼠體重明顯增加。 另一方面，大黃酚組的體重增加顯著低於未處理的HFD。 HFD組小鼠體重增加23。92±1。74 g，而大黃酚組16周後體重增加16。72±2 g ［2］。

二、大黃酚的實驗方法：

1）動物實驗

小鼠［2］-在實驗前將雄性4周齡C57BL / 6J小鼠維持1周。 在無病原體的動物設施中將小鼠維持在12小時光照/黑暗迴圈中，隨意提供實驗室飲食和水。 為了誘導肥胖，給小鼠餵食含有60％kcal％脂肪的HFD。 對照組（C）飼餵商業標準飼料。

HFD組（HFD）小鼠僅用HFD餵養。 HFD加CA組（CA）小鼠在給予大黃酚（5mg / kg /天）之前給予HFD 4周。 將小鼠分成三組（n = 5），餵食飼料，HFD和HFD加大黃酚16周。 每週測量三次體重和食物攝入量。

2）細胞實驗

將大黃酚（大黃酚）溶解於DMSO中並儲存，然後在使用前用適當的培養基稀釋［1］。 將細胞以5×10 3個細胞/ mL接種在96孔微量培養板中並使其附著24小時。

將大黃酚（20，50，80和120μM）以高達120μM的不同濃度新增到培養基中並持續不同的持續時間。 處理後，透過細胞計數試劑盒-8（CCK-8）評估細胞的細胞毒性和/或增殖。

簡而言之，高水溶性四唑鹽WST-8產生橙色水溶性產物甲。由細胞中的脫氫酶產生的甲dye染料的量與活細胞的數量成正比。向每個孔中加入CCK-8（10μL）並在37℃下孵育3小時，然後透過以下方法評估細胞增殖和細胞毒性。 使用酶標儀測量450nm處的吸光度。每個實驗條件使用3個重複的孔［1］。

綜上所述：

大黃酚是一種天然蒽醌，抑制EGF-誘導的 EGFR 磷酸化，且抑制 AKT 和 mTOR/p70S6K 啟用。它的靶點活性為EGFR。

參考文獻：

［1］。 Lee MS， et al。 Chrysophanic acid blocks proliferation of colon cancer cells by inhibiting EGFR/mTOR pathway。 Phytother Res。 2011 Jun；25（6）：833-7。

［2］。 Lim H， et al。 Chrysophanic Acid Suppresses Adipogenesis and Induces Thermogenesis by Activating AMP-Activated Protein Kinase Alpha In vivo and In vitro。 Front Pharmacol。 2016 Dec 8；7：476。